支原体感染的实验室检查

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支原体感染能够引起许多疾患。其中对泌尿系统的感染常被称为非淋菌性尿道炎（nongonococcal urethritis，NGU）

1支原体感染的实验室检查

支原体感染的实验室诊断主要是支原体的培养和血清学鉴定，目前主要采用基因诊断。

1.支原体培养：

a.采集标本，一般为泌尿生殖试子或刷片，少数取前列腺液，精液、关节液，或取输卵管，直肠活检物，近年来用初段尿标本离心物，以取代尿道拭子。拭子取材时，将拭子插入男性尿道2-4cm，用力擦取。该方法容易造成尿道损伤及继发感染。用时须慎重。女性则需先清洁宫颈鳞状与柱状上皮结合部，用细胞刷收集宫颈标本，能增加感染细胞的数量，较棉拭子敏感性高。

b.常用培养基为牛心浸液或蛋白胨，并含1%新鲜酵母浸液，10-20%动物血清及0.5%氯化钠，还可加葡萄糖和精氨酸以促进MH和MG生长，加入尿素以供UU代谢，适量加青霉素抑制杂菌。

2.血清学鉴定法：最常用的是琼脂扩散法，即将支原体接种到琼脂皿上。然后再用浸过适量血清的滤纸放到琼脂表面，观察哪一种能抑制支原体生长。也可用琼脂表面的菌落作荧光抗体染色法，用落射荧光显微镜观察，此法的优点是可以利用最初生长在琼脂表面上的菌落而不必将支原体传代。

血清学诊断试验：酶联免疫吸附试验(ELISA)敏感性高：微量免疫荧光法(MIF)具有快速特点。

3.基因诊断：利用DNA探针对支原体诊断其敏感性稍差，但特异性高，用聚合酶链反应(PCR)，敏感性、特异性均高。具体检测方面如下：

(1)标本处理

1.取材部位为子宫颈管，男性为尿道，将灭菌白金耳深入宫颈管或尿道1cm左右，转动数圈，停留约30s，取出后置标本缓冲液中。

2.解脲脲原体DNA提取：

将宫颈管内或尿道内刮取物置含0.5%NP-40、0.5%Tween20，1%SDS和2mg/ml蛋白酶K的TES缓冲液(50mmol/L Tris-HCl，50mmol/L NaCl，100mmol/ L EDTA，pH 8.0)，置37℃裂解60 min，沸水5min，酚，氯仿抽提DNA乙醇沉淀，沉淀物溶于20μl TE缓冲液(100mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA，pH 8.0)。

(2)引物设计

引物来源于解脲脲原体，脲酶基因序列：

UU1：CAGATACATTAAACGAAGCAGG(1613-1635)

UU2：GTGGTGACATACCATTAAC(1837-1819)

(3)PCR扩增

传统的方法为的反应体积为100μl，含5x反应缓冲液20μl和FD-DNA聚合酶2μ、4种dNTP各200μmol/L以及引物对各25pmol/L。上述成分预先一次性分装于0.5ml离心管，-20℃备用。临用加模板DNA 2μl，短暂离心，加100μl矿物油覆盖。现在试剂已商品化，反应体积为25μl，单管已分装好，只要加入模板DNA即可。置DNA扩增仪进行40次循环扩增。每次循环包括90℃变性45s(第一次循环变性2min)，55℃退火30s和72℃延伸40s(最后一次循环72℃，延伸5min)三个步骤。每次扩增均应作阴阳性对照。

(4)扩增产物的检测

1.5%琼脂糖凝胶电泳检测：取10u l PCR扩增物作1.5%琼脂糖凝胶电泳、0.5μg/ml溴化乙锭染色，以PGEM-3Zf(+)DNA-Hae Ⅲ为分子量标准，置紫外透射仪观察结果。

2青霉素

青霉素它不能耐受耐药菌株(如耐药金葡)所产生的酶，易被其破坏，且其抗菌谱较窄，主要对革兰氏阳性菌有效。青霉素G有钾盐、钠盐之分，钾盐不仅不能直接静注，静脉滴注时，也要仔细计算钾离子量，以免注入人体形成高血钾而抑制心脏功能，造成死亡。

青霉素类抗生素的毒性很小，由于β-内酰胺类作用于细菌的细胞壁，而人类只有细胞膜无细胞壁，故对人类的毒性较小，除能引起严重的过敏反应外，在一般用量下，其毒性不甚明显.是化疗指数最大的抗生素。但其青霉素类抗生素常见的过敏反应在各种药物中居首位，发生率最高可达5％～10％ ，为皮肤反应 ，表现皮疹、血管性水肿，最严重者为过敏性休克，多在注射后数分钟内发生，症状为呼吸困难、发绀、血压下降、昏迷、肢体强直，最后惊厥，抢救不及时可造成死亡。各种给药途径或应用各种制剂都能引起过敏性休克，但以注射用药的发生率最高。过敏反应的发生与药物剂量大小无关。对本品高度过敏者，虽极微量亦能引起休克。注入体内可致癫痫样发作。大剂量长时间注射对中枢神经系统有毒性(如引起抽搐、昏迷等)，停药或降低剂量可以恢复。

使用本品必须先做皮内试验。青霉素过敏试验包括皮肤试验方法(简称青霉素皮试)及体外试验方法，其中以皮内注射较准确。皮试本身也有一定的危险性，约有25％的过敏性休克死亡的病人死于皮试。所以皮试或注射给药时都应作好充分的抢救准备。在换用不同批号青霉素时，也需重作皮试。干粉剂可保存多年不失效，但注射液、皮试液均不稳定，以新鲜配制为佳。而且对于自肾排泄，肾功能不良者，剂量应适当调整。此外，局部应用致敏机会多，且细菌易产生抗药性，故不提倡。

【英文简介】Penicillin (sometimes abbreviated PCN) refers to a group of beta-lactam antibiotics used in the treatment of bacterial infections caused by susceptible, usually Gram-positive, organisms. The name “penicillin” can also be used in reference to a specific member of the penicillin group Penam Skeleton, which has the molecular formula R-C9H11N2O4S, where R is a variable side chain.

青霉素用于临床是40年代初，人们对青霉素进行大量研究后又发现一些青霉素，当人们又对青霉素进行化学改造，得到了一些有效的半合成青霉素，70年代又从微生物代谢物中发现了一些母核与青霉素相似也含有β－内酰胺环，而不具有四氢噻唑环结构的青霉素类，可分为三代：第一代青霉素指天然青霉素，如青霉素Ｇ（苄青霉素）；第二代青霉素是指以青霉素母核－6－氨基青霉烷酸（6－ＡＰＡ），改变侧链而得到半合成青霉素，如甲氧苯青霉素、羧苄青霉素、氨苄青霉素；第三代青霉素是母核结构带有与青霉素相同的β－内酰胺环，但不具有四氢噻唑环，如硫霉素、奴卡霉素。

按其特点可分为 ：

青霉素G类：如青霉素G钾、青霉素G钠、长效西林等。 青霉素分子结构

青霉素V类：(别名：苯氧甲基青霉素、6-苯氧乙酰胺基青霉烷酸) 如青霉素V钾等（包括有多种剂型）。

耐酶青霉素：如苯唑青霉素(新青Ⅱ号)、氯唑青霉素等。

广谱青霉素：如氨苄青霉素、羟氨苄青霉素等。

抗绿脓杆菌的广谱青霉素：如羧苄青霉素、氧哌嗪青霉素、呋苄青霉素等。

氮咪青霉素：如美西林及其酯匹美西林等，其特点为较耐酶，对某些阴性杆菌(如大肠、克雷伯氏和沙门氏菌)有效，但对绿脓杆菌效差。

3非淋菌性尿道炎常见菌群

目前，通常被称为非淋菌性尿道炎的是指衣原体（占40%-50%）、支原体（占20%-30%）及一些尚不明致病病原体（占10 20％，如阴道毛滴虫，白色念珠茵和单纯疤疹病毒）的尿道炎。除了淋球菌以外，由其他病原体引起的尿道炎统称为非淋菌性尿道炎（nongonococcal urethritis，NGU. 或称，非特异性泌尿生殖系统感染）。它是当今国内、国外最常见的性传播疾病之一，也可能与淋病并发或交叉感染。目前，通常被称为非淋菌性尿道炎的是指衣原体（占40%-50%）、支原体（占20%-30%）及一些尚不明致病病原体（占10 20%，如阴道毛滴虫，白色念珠茵和单纯疤疹病毒）的尿道炎。这类尿道炎中，已知其病原体的，则称为真菌性尿道炎和滴虫性尿道炎等，而不再包括在非淋菌性或非特异性尿道炎之内。

其主要病原体是沙眼衣原体和解脲支原体。前者占40%-60%，后者占20%-40%。

衣原体为革兰氏阴性病原体，是一种细胞内微生物，没有合成高能化合物ATP、GTP的能力，必须由宿主细胞提供，因而成为能量寄生物。以目前常用的培养方法，尿道分泌物可培养出衣原体。女性病人因多数无症状或仅表现为白带增多等妇科症状，难以确定其发病率，有人估计女性病人可能为男性的4倍。

支原体是目前所能发现的能在无生命培养基中生长繁殖的最小的微生物。现已从人类泌尿生殖道分离出来7种支原体，其中分离率较高而与泌尿生殖道疾病有关，是解脲支原体，其次是人型支原体。人型支原体（，）、解脲支原体（ urealyticum，UU）和生殖器支原体（，）都会引起泌尿生殖道感染。婴儿或无性交接触的女性生殖道内找不到解脲支原体。而性生活越乱，这种支原体阳性率也越高。 Donald 1982年报告587例急性尿道炎症状病人中，209例（36%）中段尿中分离出解脲支原体。

4非淋菌性尿道炎

柯大夫：

我与女友有过数次性生活，一个星期后，阴茎尿道口出现轻度红肿，尿道感觉瘙痒、刺痛，有少量白色黏液流出，尤以晨起为甚，服用氟嗪酸后未能见效。请问我得的是什么病，应如何治疗？

江苏傅××

傅读者：

根据你的来信介绍，属于非淋菌性尿道炎的可能性最大。该病的病原体是沙眼衣原体和支原体，潜伏期一般为1～3周。临床上非淋菌性尿道炎在急性发作时症状与淋病极为相似，但症状要轻微得多。在男性多数表现为轻度的尿道刺痒和疼痛，有少量混浊分泌物，尤其在排尿间隔时间较长或晨起排尿前，可在尿道挤出数滴分泌物，或见到内裤有污染物。女性则较少发生尿道炎，一般表现为宫颈炎，白带较平时增多、淡黄，阴道灼热，外阴瘙痒等。如不经治疗，以上症状可自行缓解或反复发作。男性可逐渐发展为前列腺炎、附睾炎，女性则可导致附件炎、盆腔炎，并可导致不孕、流产、死胎或新生儿感染。

诊断非淋菌性尿道炎要到医院做沙眼衣原体和支原体的检查，并同时做淋球菌或其它病原体的检查。由于非淋菌性尿道炎对青霉素、先锋类药物不敏感，用氟哌酸类药物效果亦差，建议由专科医生指导治疗。另外，性伴侣也应一并治疗，这特别重要。

5关注非淋菌性尿道炎的“性”福

非淋菌性尿道炎(Nongonococcal urethritis NGU) 是指性接触传染的一种尿道炎。是一组疾病的统称。

从部位说，包括了男、女性尿道的炎症和女性的宫颈及阴道的炎症。

从病原学来说更为复杂，它包括除了淋菌感染外的其他致病原引起的炎症。其中有沙眼衣原体中的性传播组D—K共八外血清型，分解尿素支原体、人型支原体、加特纳氏菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、卡他奈瑟氏菌、梭状芽孢杆菌、阴道滴虫、疱疹病毒、白色念珠菌、包皮杆菌，还有鹦鹉热支原体和兰氏鞭毛虫等。支原体和衣原体大都公认为NGU的病原体。

在传染方式上有性接触和非性接触传播。因此，NGU包括了一切除了淋菌以外的病原菌引起的尿道炎、宫颈炎及阴道炎。

非淋菌性尿道炎的男性功能障碍有性功能减退、造精、早泄、不射精和阳痿等，女性主要是性欲减退。其发病原因是非淋菌性尿道炎反复发作，治疗困难，迁延数年所致。其次是精神、心里因素，也与用药过多，乱用抗生素有关。

在治疗上，应及时治愈非淋菌性尿道炎并设法减轻病人精神负担，不能滥用抗生素。

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