引物退火温度

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Tm指的是把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度。我们PCR时候，当然不能用Tm值来作为退火的温度。一般来说，退火温度比Tm值要低上5度左右。但是这个也不是绝对的。建议你如果说模板比较充足的话，做一个梯度试验。范围在Tm值周围10度左右，如果说在这个范围内可以得到一个明显的结果就可以确定。如果说仅仅看到一个趋势，那么你还需要继续扩大这个梯度的范围来确定。

引物退火温度

计算退火温度的方法：

1. 退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8） 只是粗算，有时不灵，但比较简便。

2.用primer5（or oligo6）计算，引物配对好后，primer5可以显示Tm，我认为这个值就是退火温度，我的经验再加2 or 3度最好。

3.合成引物的单子上也有个Tm，减去5～8也可，但有些公司提供的Tm就是方法1计算的。我认为方法二最准确，

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