高效液相色谱仪测定11种三嗪类农药的含量
一、方法原理
以丙酮-二氯甲烷为提取剂，用索氏提取或加压流体萃取法提取土壤或沉积物中的三嗪类农药，提取液经固相萃取净化、浓缩、定容后用高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。
二、试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂。实验用水为新制备的超纯水或蒸馏水。
2.1 丙酮（C 3 H 6 O）：农残级。
2.2 二氯甲烷（CH 2 Cl 2 ）：农残级。
2.3 正己烷（C 6 H 14 ）：农残级。
2.4 乙腈（C 2 H 3 N）：液相色谱级。
2.5 丙酮-二氯甲烷混合溶剂：1+1。用丙酮和二氯甲烷按 1:1 体积比混合。
2.6 丙酮-正己烷混合溶剂：1+9。用丙酮和正己烷按 1:9 体积比混合。
2.7 三嗪类农药标准贮备液：ρ=1 000 mg/L。
可直接购买市售有证标准溶液，按照标准溶液证书要求进行保存，使用时应恢复至室温并摇匀。
2.8 三嗪类农药标准使用液：ρ=10.0~100 mg/L。
用乙腈稀释标准贮备液，配制成浓度为 10.0~100 mg/L 的标准使用液，于4℃以下避光、冷藏，保存时间为 60 d。
2.9 无水硫酸钠（Na 2 SO 4 ）。
使用前置于马弗炉中 450℃烘烤 4 h，冷却后装入磨口玻璃瓶中密封，于干燥器中保存。
2.10 硅藻土：粒径 150~250 μm（100~60 目）。
使用前置于马弗炉中 450℃烘烤 4 h，冷却后装入磨口玻璃瓶中密封，于干燥器中保存。
2.11 石英砂：粒径 150~250 μm（100~60 目）。
使用前置于马弗炉中 450℃烘烤 4 h，冷却后装入磨口玻璃瓶中密封，于干燥器中保存。
2.12 固相萃取柱。
市售硅酸镁、硅胶、氨基或其他等效固相萃取柱，1 000 mg/6 ml 或更大容量规格。
2.13 玻璃棉或玻璃纤维滤膜。
使用前用丙酮-二氯甲烷混合溶剂浸洗，待溶剂挥发干后，置于磨口玻璃瓶中密封保存。
2.14 索氏提取套筒：玻璃纤维或天然纤维材质套筒。
玻璃纤维套筒使用前置于马弗炉中450℃烘烤4 h，冷却后置于磨口玻璃瓶中密封保存；天然纤维材质套筒使用前用丙酮-二氯甲烷混合溶剂浸洗，待溶剂挥发干后，置于磨口玻璃瓶中密封保存。
2.15 氮气：纯度≥99.99%。
三、仪器和设备
3.1 高效液相色谱仪：具有梯度洗脱功能，柱温箱温度可控，配备紫外检测器或二极管阵列检测器。
3.2 色谱柱：填料为十八烷基硅烷键合硅胶，粒径 5 μm，柱长 250 mm，内径 4.6 mm 的色谱柱或其他等效色谱柱。
3.3 提取装置：索氏提取装置或加压流体萃取仪。
3.4 浓缩装置：旋转蒸发仪、氮吹仪或其他同等性能的浓缩设备。
3.5 固相萃取装置。
6.6 冷冻干燥仪。
3.7 棕色玻璃瓶：250 ml。
3.8 一般实验室常用仪器和设备。
四、样品
4.1 样品采集和保存
按照 HJ/T 166 的相关规定进行土壤样品的采集和保存；按照 GB 17378.3、GB 17378.5、HJ 494、HJ 495 和 HJ/T 91 的相关规定进行沉积物样品的采集和保存。
样品应于洁净的棕色玻璃瓶中保存，运输过程中应避光、密封、冷藏。如暂不能分析，土壤样品应在 4℃以下冷藏、避光保存，保存时间为 5 d（其中西玛津、西草净、阿特拉津、仲丁通、扑灭津和去草净保存时间为 15 d）；沉积物样品应冷冻、密封、避光保存，保存时间为 8 d。样品提取液（7.4.1）在 4℃以下冷藏、密封、避光保存，保存时间为60 d。
4.2 样品的制备
将样品置于不锈钢盘或聚四氟乙烯盘中，除去枝棒、叶片、石子等异物，混匀，并按照HJ/T 166 的要求进行样品缩分，可采用冷冻干燥或干燥剂两种方式脱水。
冷冻干燥法：取适量混匀后样品，放入冷冻干燥仪中干燥脱水。干燥后的样品需研磨、混匀。称取 10 g（精确到 0.01 g）样品进行提取。
干燥剂法：称取 10 g（精确到 0.01 g）新鲜样品，索氏提取法加入适量无水硫酸钠、加压流体萃取法加入适量硅藻土，研磨成流沙状，全部转移至提取装置中，待提取。
4.3 水分的测定
在称取提取样品时，另称取一份样品进行水分的测定。土壤干物质含量的测定按照 HJ613 的要求进行，沉积物含水率的测定按照 GB 17378.5 的要求进行。
4.4 试样的制备
4.4.1 提取
以丙酮-二氯甲烷混合溶剂为提取剂，用索氏提取法或加压流体萃取法提取。
索氏提取法：将全部样品小心转入索氏提取套筒内，将套筒置于索氏提取器回流管中，在底瓶中加入 200 ml 丙酮-二氯甲烷混合溶剂回流提取 24 h，回流速度控制在 3~4 次/h，收集提取液。
加压流体萃取法：按照 HJ 783 进行样品装填，静态萃取 3 次后收集提取液。萃取参考条件：载气压力 0.8 MPa、加热温度 100℃、萃取压力 1.034×10 7 Pa（1500 psi）、预加热平衡 5 min、静态萃取 5 min、溶剂淋洗 60%池体积、氮气吹扫 60 s。
注：若经过验证也可使用其他等效提取方法。
4.4.2 过滤和脱水
在玻璃漏斗内垫一层玻璃棉或玻璃纤维滤膜，加上适量无水硫酸钠，将提取液过滤到浓缩容器中。再用 2~3 ml 丙酮-二氯甲烷混合溶剂洗涤提取容器并冲洗漏斗，一并收集到浓缩容器中。
4.4.3 浓缩
将提取液浓缩至约 0.5 ml，加入约 5 ml 正己烷并浓缩至约 1 ml，将溶剂完全转换为正己烷，待净化。
4.4.4 净化
将固相萃取柱固定在固相萃取装置上。依次用 5 ml 丙酮和 10 ml正己烷活化萃取柱，保持柱头浸润。在溶剂流干之前，将浓缩后的约 1 ml 提取液转入柱内，开始收集流出液，用 3 ml 正己烷分 3 次洗涤浓缩容器，洗液全部移入柱内，用 10 ml 丙酮-正己烷混合溶剂进行洗脱，收集全部洗脱液。
4.4.5 浓缩定容
将净化后的洗脱液浓缩至约 0.5 ml，加入约 3 ml 乙腈，再浓缩至约 0.5 ml，将溶剂完全转换为乙腈，并用乙腈定容至 1.0 ml 待测。
五、分析步骤
5.1 仪器参考条件
流动相：A 为水，B 为乙腈，梯度洗脱参考程序见表 1；
流速：1.0 ml/min；
柱温：30℃；
进样量：10 μl；
检测波长：222 nm，辅助定性波长：231 nm。
5.2 标准曲线的建立
取一定量三嗪类农药标准使用液，用乙腈稀释，配制至少 5 个浓度点的标准系列，目标化合物质量浓度分别为 1.00 mg/L、10.0 mg/L、25.0 mg/L、50.0 mg/L、100 mg/L，贮存于棕色进样瓶中，待测。按照仪器参考条件，从低浓度到高浓度依次进样分析，以标准系列溶液中目标化合物浓度为横坐标，以其对应峰面积（峰高）为纵坐标，建立标准曲线。
5.3 标准样品色谱图
图 1 为 11 种三嗪类农药参考色谱图。
1—西玛津；2—莠去通；3—西草净；4—阿特拉津；5—仲丁通；6—扑灭通；
7—莠灭净；8—扑灭津；9—特丁津；10—扑草净；11—去草净
图 1 11 种三嗪类农药标准样品参考色谱图（ρ=5.00 mg/L）
5.4 试样测定
按照与标准曲线相同仪器条件进行试样的测定。若试样中目标化合物浓度超出标准曲线范围，样品需要重新提取，分取适量提取液后按步骤 7.4.2~7.4.5 重新处理后测定。
六、结果计算与表示
6.1 定性分析
以目标化合物的保留时间定性，必要时可采用标准样品加入法、不同波长下的吸收比、紫外光谱图扫描等方法辅助定性。
6.2 结果计算
土壤样品中三嗪类农药的质量浓度按式（1）计算：
式中：w i ——样品中目标化合物 i 的质量浓度，mg/kg；
ρ i ——由标准曲线所得试样中目标化合物 i 的质量浓度，mg/L；
V i ——试样定容体积，ml；
m i ——样品量，g；
w dm ——样品的干物质含量，%；
V 0 ——总提取液体积，ml；
V——分析时所用提取液体积，ml。
沉积物样品中三嗪类农药的质量浓度按式（2）计算：
式中：w j ——样品中目标化合物 j 的质量浓度，mg/kg；
ρ j ——由标准曲线所得试样中目标化合物 j 的质量浓度，mg/L；
V j ——试样定容体积，ml；
m j ——样品量，g；
w H 2 O ——样品的含水率，%；
V 0 ——总提取液体积，ml；
V——分析时所用提取液体积，ml。
6.3 结果表示
测定结果小数点后位数的保留与方法检出限一致，最多保留 3 位有效数字
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